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Inmunofluorescencia

Tabla de contenidos

Concepto

La inmunofluorescencia (IF) es una técnica que emplea anticuerpos conjugados a fluorocromos. Los fluorocromos son moléculas que al ser excitadas con la energía de una determinada longitud de onda son capaces de emitir energía de una longitud de onda mayor.

Se aplica en diagnóstico de patologías cutáneas y renales e investigación.

Inmunofluorescencia directa

La IF directa permite la detección de antígenos en un paso. Utiliza anticuerpos conjugados a isotiocianato de fluoresceína. La lectura se realiza en un microscopio de fluorescencia, que emite luz ultravioleta de una determinada longitud de onda.

Inmunofluorescencia indirecta

La IF indirecta permite la detección de anticuerpos circulantes.

Ventajas y desventajas

Las ventajas de la IF son que es una técnica rápida, reproducible, permite tinciones dobles e incluso se aplica en microscopia confocal. Las desventajas son su baja sensibilidad, que las reacciones no son permanentes y que es necesario fotografiar las reacciones positivas para documentar los casos. Además, requiere microscopio de fluorescencia, que es un instrumento de relativo alto costo.

Por otra parte, las muestras deben ser procesadas en fresco, ya que se requieren cortes por congelación en criostato. Para enviar las muestras de piel en fresco se requiere usualmente envolverla en una gasa humedecida en suero y procurar que el traslado no demore más de 45 minutos. No es necesario sumergir la muestra en ningún líquido. Para el transporte de muestras desde sitios alejados existe la posibilidad de utilizar un medio especial de conservación para el trasporte y para ello es necesario contactar previamente al laboratorio de Anatomía Patológica para las instrucciones correspondientes.

Técnica

En el caso de lesiones cutáneas como manifestación de enfermedades reumatológicas, las indicaciones más frecuentes son enfermedades ampollares, vasculitis y tests de banda lúpica.

Es importante conocer el mejor sitio de biopsia, ya que el rendimiento óptimo de la técnica depende de la enfermedad en estudio.

Se reconocen los siguientes patrones de reacción en la IF directa de piel:

Fluorescencia intraepitelial
Pénfigo vulgar, p. vegetante, p. foliáceo, p. eritematoso, p. paraneoplásico, LECSA.
Fluorescencia de membrana basal
Penfigoide buloso, p. gestacional, LE, dermatosis IgA lineal, dermatitis herpetiforme.
Fluorescencia vascular y perivascular
Porfiria cutánea, pseudoporfiria, vasculitis leucocitoclástica, v. Schönlein-Henoch.

En biopsia cutánea por sospecha de vasculitis, la biopsia quirúrgica es óptima, ya que permite evaluar todos los estratos de la piel, incluida hipodermis. La biopsia punch es suficiente, pero la biopsia por shave es definitivamente insuficiente. La muestra debe procesarse para HE convencional e IFD. Lo ideal es obtener una muestra de una lesión temprana o reciente sin necrosis y que no incluya úlcera. La dermis subyacente a la úlcera suele mostrar alteraciones en la pared de los vasos sanguíneos secundarias a la inflamación, inespecíficas, que pueden confundirse con vasculitis.

En púrpura de Schönlein-Henoch, la biopsia cutánea de una lesión vasculítica puede ser de gran valor diagnóstico, ya que muestra vasculitis leucocitoclástica y un patrón de IFD vascular con depósito de IgA y c3.

En la enfermedad de Behçet, los criterios diagnósticos incluyen las manifestacioens cutáneas y la prueba de patergia, ambas situaciones en las cuales el estudio histopatológico puede ser de gran ayuda. Las alteraciones en las aftas orales se caracterizan por úlceras con vasculitis predominantemente linfocitaria; en la prueba de patergia, los hallazgos típicos son una inflamación neutrofílica supurativa aséptica con componente de vasculitis linfocitaria también.

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